客戶服務(wù)熱線
400-0470-600
微信
13903605303
客戶服務(wù)熱線
400-0470-600
微信
13903605303
| LAMP擴(kuò)增基于獨(dú)特引物設(shè)計(jì)的高靈敏度等溫?cái)U(kuò)增機(jī)制，在恒溫條件下（通常60-65°C）實(shí)現(xiàn)指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，無(wú)需復(fù)雜的熱循環(huán)設(shè)備，使得檢測(cè)兼具快速性與設(shè)備簡(jiǎn)易性，極大地適用于現(xiàn)場(chǎng)和資源有限場(chǎng)景。但正是由于其超高靈敏性及擴(kuò)增效率，氣溶膠污染發(fā)生的幾率就比 較大，從而會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性擴(kuò)增，影響結(jié)果的判讀。對(duì)于LAMP的氣溶膠污染，通常建議進(jìn)行分區(qū)操作或單向工作流程操作，但這并不是有 效解決辦法。 針對(duì)此問(wèn)題，基于dUTP/UNG的化學(xué)防污染方案可很好的解決LAMP氣溶膠污染。通過(guò)在反應(yīng)預(yù)混液中摻入dUTP，使所有新合成的擴(kuò)增 子中的脫氧胸腺嘧啶核苷（dTTP）被脫氧尿嘧啶核苷（dUTP）替代，生成含尿嘧啶的DNA。在反應(yīng)開始前，加入熱敏型UDG酶,該酶能特異 性水解含尿嘧啶的DNA鏈中的尿嘧啶糖苷鍵，從而高效降解任何先前遺留的含dUTP污染產(chǎn)物。那么問(wèn)題來(lái)了，據(jù)文獻(xiàn)支持，BSt大片段或 Bst2.0 DNA聚合酶識(shí)別dUTP的能力并不高，相比dTTP擴(kuò)增效率顯著降低。 Bst dU5.0 DNA聚合酶是HaiGene于2025年底推出的創(chuàng)新型Bst DNA聚合酶。該酶融合了Bst2.0(dUTP滲入能力)、Bst3.0(快速擴(kuò)增 、抗雜質(zhì))、Bst4.2（70℃高溫反應(yīng)）優(yōu)勢(shì)于一身，與高性能的Bst XT等聚合酶相比，該酶還可完全使用dUTP(100%)來(lái)代替反應(yīng)體系中的 dTTP。100%dUTP的使用能力，對(duì)于LAMP的防污染至關(guān)重要。此外，該酶不僅通用于DNA或RNA的LAMP擴(kuò)增，而且全系產(chǎn)品均為熱啟動(dòng)版本 。 |
||
主要特征 |
||
|
||
實(shí)例展示 |
||
| 1、dNTP和dUTP使用速度比較 Bst 2.0與Bst dU5.0在使用100%dUTP核苷酸底物時(shí)，LAMP擴(kuò)增低豐度模板的情況比較。結(jié)果顯示：Bst dU5.0在使用100%dUTP時(shí)，表現(xiàn)出 與dNTP一致的擴(kuò)增速度。而Bst2.0在使用全dUTP時(shí)，出現(xiàn)不同程度的擴(kuò)增滯后（可能與擴(kuò)增區(qū)域GC含量有關(guān)）。 |
||
 |
||
| 2、UDG對(duì)Bst dU5.0聚合酶的100%dU 擴(kuò)增產(chǎn)物的消化能力測(cè)試 泳道1:dNTP擴(kuò)增產(chǎn)物，無(wú)UDG消化;泳道2:dNTP擴(kuò)增產(chǎn)物，20U的UDG消化;泳道3:100%dUTP擴(kuò)增產(chǎn)物，無(wú)UDG消化;泳道4:100%dUTP擴(kuò)增產(chǎn)物，20U的UDG消化。結(jié)果顯示：高分子量的dU-LAMP產(chǎn)物均被UDG酶有效的切割。在后續(xù)的擴(kuò)增中，該產(chǎn)物不能再被擴(kuò)增，從而有效的避免氣溶膠污染。 |
||
 |
||
| 3、Bst dU5.0 DNA聚合酶熒光LAMP抗污染能力測(cè)試 在20μl的LAMP反應(yīng)體系中加入污染物，即造成遠(yuǎn)高于檢測(cè)模板的擴(kuò)增（藍(lán)線和紅線），由圖可見(jiàn)20cps-污染物（藍(lán)線）快于1000cps-RNA(綠線)的檢測(cè)。在反應(yīng)體系中加入終濃度10mU/ul的熱敏UDG后，污染物引起的假陽(yáng)性消除(黑線和橙線)。結(jié)果表明:采用100%dU作為底物進(jìn)行LAMP擴(kuò)增，并聯(lián)合熱敏UDG可有效減少LAMP假陽(yáng)性擴(kuò)增。值得注意的是，在HaiGene的其它測(cè)試中加入20%的dTTP后，假陽(yáng)性擴(kuò)增并不能有效消除。這表明在LAMP擴(kuò)曾中，為防止假陽(yáng)性擴(kuò)增，采用100%dUTP作為底物的必要性，HaiGene確保Bst dU5.0系列試劑為100%dU底物。因此建議實(shí)驗(yàn)室始終采用dUTP為底物進(jìn)行LAMP擴(kuò)增，一旦發(fā)生污染，可通過(guò)加入熱敏UDG進(jìn)行消除。而采用dNTP擴(kuò)增導(dǎo)致氣溶膠污染后，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室將面臨數(shù)周以上的停擺風(fēng)險(xiǎn)。 |
||
 |
||
上一頁(yè)：第一頁(yè)
